芋頭（Colocasia esculenta (L.) S.chott）屬于塊莖植物，富含淀粉、酚類化合物、蛋白質(zhì)、多糖、維生 素和多種礦物質(zhì)，具有健脾消食、預(yù)防齲齒、降低 膽固醇水平、提高機(jī)體免疫力、改善便秘等諸多生理功能。近年來(lái)，鮮切是食品工業(yè)重要加工方式之一。超濾離心管（10 kDa） 德國(guó)Millipore公司； AKTA蛋白質(zhì)層析純化系統(tǒng) 美國(guó)General Elecric公司； DEAE-Sepharose Fast Flow（DEAE-SFF）層析柱 英國(guó) Waterman公司；Superdex G-75凝膠柱 瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司；CR22N/21N冷凍離心機(jī) 日本 日立公司；UV-5500紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海元析 儀器有限公司；GJ-18S冷凍干燥機(jī) 北京松源華興科 技發(fā)展公司；低溫冰箱（－80 ℃） 日本Sanyo公司； WH-600-LCD型電泳儀 北京市六一儀器廠；HHS11-2型數(shù) 顯式電熱恒溫水浴鍋 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè) 備廠；Biodoc-IT 220普通凝膠成像系統(tǒng) Analytik Jena 美國(guó)有限責(zé)任合伙公司；iMark全自動(dòng)酶標(biāo)儀 美國(guó) Bio-Rad公司；BL35A11多功能料理機(jī) 中國(guó)美的集團(tuán)股 份有限公司；XHF-D勻漿機(jī) 寧波新芝生物科技股份有限 公司；101FA-2電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海一恒科學(xué)儀器有限 公司；Delta 320 pH計(jì) 瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司。

    利用DEAE-SFF柱將超濾處理后的粗酶液進(jìn)行分離 純化。將超純水、1 mol/L NaCl溶液、0.1 mol/L磷酸鹽緩 沖溶液（pH 6.8）、體積分?jǐn)?shù)20%的乙醇溶液過(guò)0.22 μm 膜備用。先利用過(guò)膜的超純水清洗系統(tǒng)和DEAE-SFF層析 柱，再使用0.1 mol/L磷酸鹽緩沖溶液（pH 6.8）清洗系統(tǒng) 和平衡柱子。超濾后樣品經(jīng)過(guò)0.22 μm膜過(guò)濾后上樣，洗 脫流速為1.0 mL/min，收集速度5 mL/管，并按收集順序 從標(biāo)記管號(hào)，測(cè)定所收集各峰組分的PPO活性和蛋白質(zhì) 濃度。用0.1 mol/L磷酸鹽緩沖液將PPO活性測(cè)定體系的pH 值范圍調(diào)整到4.0～8.0之間，并按照0.4的pH值衡量單位 以確定PPO的最適反應(yīng)pH值。以鄰苯二酚溶液為底物， 待鄰苯二酚溶液在指定pH值（pH 4～8）平衡后，迅速加 入PPO，測(cè)定其420 nm的吸光度，后續(xù)實(shí)驗(yàn)均采用最佳 pH值。